今天讓我們一起來了解一下酵母雙雜交載體的篩選藥物作用位點及藥物對蛋白相互作用影響
酵母雙雜交的報告基因能否表達(dá)在于誘餌蛋白與靶蛋白之間的相互作用。對于能夠引發(fā)疾病反應(yīng)的蛋白互作可以采取藥物干擾的方法，阻止它們的相互作用以達(dá)到治療疾病的目的。
例如:Dengue病毒能引起黃熱病、肝炎等疾病，研究發(fā)現(xiàn)它的病毒RNA復(fù)制與依賴于RNA的RNA聚合酶(NS5)與拓?fù)洚悩?gòu)酶NS3，以及細(xì)胞核轉(zhuǎn)運受體BETA-importin的相互作用有關(guān)。
研究人員通過酵母雙雜交技術(shù)找到了這些蛋白之間相互作用的氨基酸序列。如果能找到相應(yīng)的基因藥物阻斷這些蛋白之間的相互作用，就可以阻止RNA病毒的復(fù)制，從而達(dá)到治療這種疾病的目的。
酵母雙雜交系統(tǒng)的最主要的應(yīng)用是快速、直接分析已知蛋白之間的相互作用及分離新的與已知蛋白作用的配體及其編碼基因。
酵母雙雜交系統(tǒng)檢測蛋白之間的相互作用具有以下優(yōu)點:
⑴ 作用信號是在融合基因表達(dá)后， 在細(xì)胞內(nèi)重建轉(zhuǎn)錄因子的作用而給出的， 省去了純化蛋白質(zhì)的繁瑣步驟。
⑵ 檢測在活細(xì)胞內(nèi)進行， 可以在一定程度上代表細(xì)胞內(nèi)的真實情況。
⑶ 檢測的結(jié)果可以是基因表達(dá)產(chǎn)物的積累效應(yīng)， 因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時的相互作用。
?、冉湍鸽p雜交系統(tǒng)可采用不同組織、器官、細(xì)胞類型和分化時期材料構(gòu)建cDNA文庫， 能分析細(xì)胞漿、細(xì)胞核及膜結(jié)合蛋白等多種不同亞細(xì)胞部位及功能的蛋白。例如已報道成功分析了RAP1與RIF1ii、P21cip1與CDK2iii、p16與CDK4iv等之間的相互作用。